採ったらすぐホルマリン―病理標本づくりは「固定」から始まる

病理組織標本ができるまでの流れ（検体処理）の最初のステップである「固定」について問う問題である。 生体から切り離された組織では、細胞自身の酵素による自己融解（autolysis）と細菌による腐敗がただちに始まり、時間とともに細胞の形態が崩れていく。そこで、採取直後に固定液に浸して組織中の蛋白質を変性・架橋させ、細胞や組織の構造を生きていたときに近い状態で安定化させる。これを固定という。ヘマトキシリン・エオジン（H-E）染色による通常の病理組織診断では、固定液として10%ホルマリン（実際には中性緩衝ホルマリンが推奨される）が標準的に用いられる。ホルマリンはホルムアルデヒドの水溶液で、蛋白質のアミノ基などの間にメチレン架橋をつくって組織構造を保持する。 ホルマリン固定後の標本作製は、おおむね次の順で進む。 1. 固定：10%ホルマリンに浸す（検体量の十分な倍量の固定液を用いる）。 2. 脱水：濃度を段階的に上げたアルコールで組織中の水分を除く。 3. 透徹：キシレンなどでアルコールを置き換え、パラフィンがしみ込みやすくする。 4. 包埋：溶かしたパラフィンを浸透させて固め、パラフィンブロックをつくる。 5. 薄切：ミクロトームで数μm（3〜4μm程度）の厚さに切る。 6. 脱パラフィン後に染色：H-E染色では、ヘマトキシリンが核を青紫色に、エオジンが細胞質や膠原線維を桃〜赤色に染める。 したがって、内視鏡下生検の検体を「直ちに浸す」べきものは、標本作製の第一段階である固定に用いるホルマリン溶液である。パラフィンは後の包埋の段階で用いる材料であり、採取直後に浸すものではない。

検査目的別の固定法の整理

・病理組織診断（H-E染色、免疫組織化学染色）：10%（中性緩衝）ホルマリン固定 → パラフィン包埋。 ・電子顕微鏡検査：グルタールアルデヒド固定（必要に応じてオスミウム酸で後固定）。微細構造の保持に優れる。腎生検などで用いられる。 ・術中迅速診断：固定せずに凍結し、凍結切片を作製して短時間で診断する。脂肪染色（Sudan III、Oil red Oなど）を行う場合も、アルコールで脂肪が溶け出さないよう凍結切片を用いる。 ・細胞診（Papanicolaou染色）：塗抹直後に95%エタノールなどに浸す湿固定。乾燥させると細胞が変性するため、塗抹後すぐに固定する。固定は通常10〜15分程度で完了する。 ・Giemsa染色（細胞診の一部、骨髄・末梢血塗抹標本）：冷風などで速やかに乾燥させる乾燥固定のあとにメタノールで固定して染色する。 ・微生物の培養検査に提出する組織：固定せず、生理食塩水などで乾燥を防いで提出する（ホルマリンに入れると菌が死滅する）。

細胞診の対象となる検体

固形の組織として採取できない検体が対象である。子宮頸部などの擦過検体、胸水・腹水・尿などの液状検体、喀痰、乳腺腫瘤や甲状腺結節の穿刺吸引検体などがこれにあたる。

H-E染色の色調

ヘマトキシリン（塩基性色素として振る舞う）は核のクロマチンなど酸性構造を青紫色に、エオジン（酸性色素）は細胞質や膠原線維、赤血球などの塩基性構造を桃〜赤色に染める。